柱式病毒RNA提取試劑盒

柱式病毒RNA提取試劑盒是在一管式病毒RNAout的基礎(chǔ)上開(kāi)發(fā)的、專(zhuān)門(mén)用于 從血清(血漿)等液體樣品中提取微量病毒RNA的產(chǎn)品，它具有下列特點(diǎn)：

1. 操作簡(jiǎn)單，整個(gè)過(guò)程只需要 20 分鐘左右，不需要額外在洗柱液中補(bǔ)加 乙醇。

2. 靈敏度高，通過(guò) RT-PCR 檢測(cè)到的終靈敏度可以達(dá)到 50 拷貝/mL。

3. 安全無(wú)毒。

4. 如果加上病毒離心富集步驟，多可以處理 1.5 mL 液體病毒樣品。

5. 與 RT-PCR 和熒光 RT-PCR 兼容。

6. 價(jià)廉物美，性?xún)r(jià)比遠(yuǎn)低于國(guó)外同類(lèi)產(chǎn)品。

7. 適用于各種材料，包括血清、血漿、腦脊液、尿液、糞便、培養(yǎng)細(xì)胞上清液等無(wú)細(xì)胞材料。

1. 如果有 N 個(gè)樣品，標(biāo)記 N+2 個(gè) 1.5-2 mL 螺旋蓋塑料離心管，多出的一個(gè)為陽(yáng)性對(duì)照，一個(gè)為陰性 對(duì)照。為避免污染，建議不要使用壓蓋式塑料離心管。在每個(gè)管上做 個(gè)標(biāo)記，以在后續(xù)操作時(shí)區(qū)別向心面和離心面。然后各加入 0.2 mL 液體樣品（血清、血漿、尿液、腦脊液、唾液、眼淚等等）。

1.1、 如果是口腔拭子、咽喉拭子等各種拭子樣品，則將拭子放入 0.2mL 自備生理鹽水中擠壓出液體，然后取 0.2mL 進(jìn)行提取。

1.2、 如果是糞便等半固定樣品，則取約 0.3mL 的樣品，加入 0,3 自備生理鹽水，震蕩重懸，離心取 0.2mL 上清進(jìn)行提取。

1.3、 如果血液，細(xì)胞培養(yǎng)液等含細(xì)胞的液體，可以離心用上清，也可以直接取用，但后者提取的 RNA 中有細(xì)胞的基因組 DNA 污 染。血漿的抗凝劑必須是 EDTA 或 ACD，不能是肝素。使用 ACD 時(shí)由于所加入 ACD 會(huì)增加體積，樣品會(huì)被稀釋?zhuān)玫降?病毒滴度會(huì)比使用 EDTA 低 15%左右。血漿按 0.6mL/ 管的量分裝保存，以避免反復(fù)凍融。

1.4、 如果樣品是實(shí)體組織或培養(yǎng)細(xì)胞，則需要在自備生理鹽水中勻漿后離心，用 0.2mL 上清液（含病毒）進(jìn)行提取，但此種情 況下后得到的 RNA 不可避免的會(huì)含有基因組 DNA 污染。

1.5、 如果液體樣品中的病毒需要富集，可以使用 1.5 mL 上述方法得到的液體在 4℃ 24,000 g 冷凍離心 60 分鐘, 移棄 1.3 mL、 用剩下的 0.2mL 繼續(xù)操作。 

2. 加入 0.6 mL RNA 病毒裂解液，振蕩 30 秒混勻后室溫放置 10 分鐘。 注意：RNA 病毒裂解液在 4℃放置后可能會(huì)產(chǎn)生沉淀，使用前必須放在 65℃水浴使沉淀*溶解并充分搖勻后再取用。

3. 加入 0.8mL 上柱結(jié)合液到離心管中，顛倒混勻后轉(zhuǎn)移一半的混合液 （0.8 mL）到離心吸附柱中，室溫放置 2 分鐘。

4. 12,000 rpm 室溫離心 1 分鐘，棄收集管中的穿透液，把離心吸附柱 放回到收集管中。

5. 將剩余的另外一半裂解液（0.8mL）轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中，室溫放置 2 分鐘。

6. 12,000 rpm 室溫離心 1 分鐘，棄收集管中的穿透液，把離心吸附柱 放回到收集管中。

7. 加入 0.7 mL 通用洗柱液到離心吸附柱中，12,000 rmp 室溫離心 1 分鐘，棄收集管中的穿透液，把離心吸附柱放回到收集管中。

8. 加入 0.3 mL 通用洗柱液到離心吸附柱中，12,000 rmp 室溫離心 1 分鐘，棄收集管中的穿透液，把離心吸附柱放回到收集管中。此為第 二次洗滌，可以跳過(guò)。

9. 12000 g 室溫離心半分鐘。

10. 在離心吸附柱的濾膜的中部加入 30-100 uL RNA 洗脫液，然后將離心吸附柱套入一新的 1.5 mL 離心管中，室溫放置 2 分鐘。

11. 12000 g 室溫離心 1 分鐘，離心管中收集的樣品即為 RNA。

12. RNA 樣品可以直接用于 RT-PCR 或逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，也可放-80℃長(zhǎng)期保存。

柱式病毒RNA提取試劑盒