培養(yǎng)基(Medium)是供微生物、植物和動物組織生長和維持用的人工配制的養(yǎng)料,一般都含有水、氮源、無機鹽(包括微量元素)、碳源、生長因子(維生素、氨基酸、堿基、抗菌素、色素、激素和血清等)等。培養(yǎng)基是指供給微生物、植物或動物(或組織)生長繁殖的,由不同營養(yǎng)物質(zhì)組合配制而成的營養(yǎng)基質(zhì)。一般都含有碳水化合物、含氮物質(zhì)、無機鹽(包括微量元素)、維生素和水等幾大類物質(zhì)。培養(yǎng)基既是提供細胞營養(yǎng)和促使細胞增殖的基礎(chǔ)物質(zhì),也是細胞生長和繁殖的生存環(huán)境。
基礎(chǔ)調(diào)節(jié)原則:
調(diào)節(jié)時機--定容完成后、滅菌前調(diào)節(jié)pH,滅菌后需復(fù)核(高壓滅菌可能導(dǎo)致pH下降0.2–0.5)--所有培養(yǎng)基配制流程
調(diào)節(jié)劑選擇--1M-6M NaOH或HCl(高濃度減少體積誤差)--微生物/植物/動物細胞培養(yǎng)
目標(biāo)范圍--
- 植物組培:pH5.6-6.0(常用5.8)
- 細菌培養(yǎng):pH6.5-7.5(中性偏堿)
- 真菌培養(yǎng):pH4.0-6.0(酸性)
操作細節(jié):
分步調(diào)節(jié)法:
定量加入調(diào)節(jié)劑后充分?jǐn)嚢?zwnj;,靜置1-2分鐘再檢測,避免局部過酸/堿;
少量多次添加(每次 ≤0.5ml),接近目標(biāo)值時改用低濃度調(diào)節(jié)劑微調(diào);
植物組培中,若初始pH>6.0,需用0.1M HCl回調(diào)至5.8±0.1。
緩沖系統(tǒng)應(yīng)用:
對代謝產(chǎn)酸微生物(如乳酸菌),添加 磷酸鹽緩沖劑(pH6.4-7.2)或碳酸鹽緩沖劑;
動物細胞培養(yǎng)需CO?-碳酸氫鈉緩沖體系維持pH7.0-7.4。