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        艱難梭菌(TCD-B)核酸檢測試劑盒(熒光PCR法)

        更新日期: 2022-04-23
        瀏覽人氣: 2105

                        艱難梭菌(TCD-B)核酸檢測試劑盒(熒光PCR法)

        【產品名稱】

        商品名稱:艱難梭菌(TCD-B)核酸檢測試劑盒(熒光 PCR 法)

        Name :Diagnostic Kit for Clostridiumdifficile tcd-B gene (Real-Time PCR Method)

        【包裝規格】50T/盒

        【預期用途】

        本試劑盒適用于檢測從水樣糞便等標本中分離出的毒素 B 型艱難梭菌,用于艱難梭菌的輔助診斷,其檢測結果僅供臨床參考。

        【檢驗原理】

        本試劑盒用一對艱難梭菌毒素 B 基因特異性引物,結合一條特異性熒光探針,用一步法熒光 RT-PCR 技術對艱難梭菌毒素 B 基因進行體外擴增檢測,用于臨床上對可疑感染者的病原學診斷。

        【試劑組成】

        包裝規格

        50T/盒

        TCD-B 反應液

        500μL×2 管

        酶液

        50μL×1   管

        TCD-B 陽性質控品

        50μL ×1 管

        陰性質控品

        250μL   ×1 管

        說明:不同批號的試劑盒組分不可交互使用。

        【儲存條件及有效期】

        -20℃±5℃,避光保存、運輸、反復凍融次數不超過 5 次,有效期 12 個月。

        【適用儀器】

        ABI 、安捷倫 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測儀。

        【標本采集】

        取水樣便 0.5~1mL

        【保存和運輸】

        上述標本短期內可保存于-20℃,長期保存可置-70℃,但不能超過 6 個月,標本運送應采用 2~8℃冰袋運輸,嚴禁反復凍融。

        【使用方法】

        1.  樣品處理(樣本處理區)

        1.1     樣本前處理

        13000rpm 離心 2min,去盡上清

        1.2    核酸提取

        推薦采用上海烜雅生物科技有限公司生產的核酸提取或純化試劑(磁珠法或離心柱法)進行核酸提取,請    按照試劑說明書進行操作。

        2.  試劑配制(試劑準備區)

        根據待檢測樣本總數,設所需要的 PCR 反應管管數為 N(N=樣本數+1 管陰性對照+1 管陽性對照;反應管數每滿 10 份,多配制 1 份),每測試反應體系配制如下表:

        試劑

        TCD-B 反應液

        酶液

        用量

        20μL

        1μL

        將混合好的測試反應液分裝到 PCR 反應管中,21μL/管。

        3.  加樣(樣本處理區)

        將步驟 1 提取的核酸、陽性質控品、陰性質控品各取 4μL,分別加入相應的反應管中,蓋好管蓋,混勻, 短暫離心。

        4.  PCR 擴增(核酸擴增區)

        4.1  將待檢測反應管置于熒光定量 PCR 儀反應槽內;

        4.2  設置好通道、樣品信息,反應體系設置為 25μL;

        熒光通道選擇: 檢測通道(Reporter Dye)FAM, 淬滅通道(Quencher Dye)NONE,ABI 系列儀器請勿選擇 ROX 參比熒光,選擇 None 即可。

        4.3  推薦循環參數設置:

        步驟

        循環數

        溫度

        時間

        收集熒光信號


         

        1

        1 cycle

        95℃

        10min

        2

        40 cycles

        94℃

        15sec

        55℃

        30sec

        5.  結果分析判定

        5.1  結果分析條件設定

        設置 Baseline 和 Threshold:一般直接按機器自動分析的結果分析,當曲線出現整體傾斜時,根據分析后圖像調節 Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范圍內調節)、stop 值(一般可在 5~20 范圍內調節),以及

        Threshold 的 Value 值(上下拖動閾值線至高于陰性對照),重新分析結果。

        5.2  結果判斷

        陽性:檢測通道 Ct 值≤35,且曲線有明顯的指數增長曲線;

        可疑:檢測通道 35<Ct 值≤38,建議重復檢測,如果檢測通道仍為 35<Ct 值≤38,且曲線有明顯的增長曲線, 判定為陽性,否則為陰性;

        陰性:樣本檢測結果 Ct 值>38 或無 Ct 值。

        6.  質控標準

        陰性質控品:Ct>38 或無 Ct 值顯示;

        陽性質控品:擴增曲線有明顯指數生長期,且 Ct 值≤32; 以上條件應同時滿足,否則實驗視為無效。

        1.  檢測方法的局限性

        1. 樣本檢測結果與樣本收集、處理、運送以及保存質量有關;

        2. 樣本提取過程中沒有控制好交叉污染,會出現假陽性結果;

        3. 陽性對照、擴增產物泄漏,會導致假陽性結果;

        4. 病原體在流行過程中基因突變、重組,會導致假陰性結果;

        5. 不同的提取方法存在提取效率差異,會導致假陰性結果;

        6. 試劑運輸,保存不當或試劑配制不準確引起的試劑檢測效能下降,出現假陰性或定量檢測不準確的結果;

        7. 本檢測結果僅供參考,如須確診請結合臨床癥狀以及其他檢測手段。

        【注意事項】

        1. 所有操作嚴格按照說明書進行;

        2. 試劑盒內各種組分使用前應自然融化,*混勻并短暫離心;

        3. 反應液應避光保存;

        4. 反應中盡量避免氣泡存在,管蓋需蓋緊;

        5. 使用一次性吸頭、一次性手套和各區專用工作服;

        6. 樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區進行,以免交叉污染;

        7. 實驗完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺和移液器;

        8. 試劑盒里所有物品應視為污染物對待,并按照《微生物生物醫學實驗室生物安全通則》進行處理。

        【生產企業】

        企業名稱:上海晅科生物科技有限公司


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